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荧光素酶报告基因载体构建及检测
  • 作者:admin
  • 发表时间:2017-09-28 14:43
  • 来源:未知

一、实验原理
当miRNAs与靶基因的3’UTR结合后,主要抑制mRNA的翻译,可以Western Blot检测靶蛋白的表达水平;也有部分表现为对标靶mRNA的降解,可以采用qRT-PCR进行检测。但无论那一种方法,都不能有效说明是miRNAs直接作用的结果。直接的证据在于Sensor reporter的构建与活性检测,Biscien的技术人员利用Promega特有psiCHECK质粒,对miRNAs与靶基因3’UTR的关系作出准确判断。
二、实验流程
1、PCR扩增靶基因的3’UTR,或直接合成结合位点序列(1-3次重复);2、将上述DNA片段克隆至报告载体psiCHECK质粒;
 3、合成miRNA 模拟物;
 4、将报告载体与miRNA模拟物共转待检细胞;
5、多功能酶标仪检测报告基因的表达水平。
三、公司服务
客户提供:客户需提供miRNA与靶基因序列信息、相应检测细胞株
公司提供:克隆有靶基因3’UTR或结合位点序列的报告质粒、检测结果与完整的实验报告。