一、实验原理
克隆指单个细胞在体外持续分裂增殖6代以上，其后代所组成的细胞群。光镜下，大于50个细胞，计数为1个克隆。
细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁写的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖能力的细胞。
二、实验流程
1.      平板克隆形成试验：适用于贴壁型细胞，如正常细胞或肿瘤细胞；控制细胞迁移
(1)取对数生长期的单层培养细胞，用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，把细胞悬浮在10%胎牛血清的RPMI1640培养液中备用。
(2)将细胞悬液作梯度倍数稀释，以适当的细胞密度(根据增殖能力) 接种于培养皿中。一般分每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37℃预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37℃ 5% CO2及饱和湿度的环境下，静置培养2～3周。
(3)经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS 小心浸洗2次。加纯甲醇或1:3醋酸/甲醇5mL ，固定15分钟。然后去固定液，加适量Giemsa 应用染色液染10～30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。
(4)将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数克隆，或在显微镜(低倍镜) 计数大于10个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。
2.      软琼脂克隆形成试验：适用于肿瘤细胞、转化细胞和悬浮生长细胞；无细胞迁移；底层为0.5%琼脂，上层为0.3%琼脂（含细胞）
(1)取对数生长期细胞，用0.25%胰蛋白酶消化并轻轻吹打，使之成为单细胞，作活细胞计数，用含20%胎牛血清的DMEM 培养液调整细胞密度至1×106细胞/L。然后根据实验要求作梯度倍数稀释。
(2)用蒸馏水分别制备出1.2%和0.7%两个浓度的低溶点琼脂糖液，高压灭菌后，维持在40℃中不会凝固。
(3)按1:1比例使1.2%的琼脂糖和2×DMEM 培养基(含有2×抗生素和20%的小牛血清) 混合后，取3mL 混合液注入直径6cm 平皿中(10cm平皿加7～10mL) ，冷却凝固，可作底层琼脂置CO2温箱中备用。
(4)按1:1比例让0.7%的琼脂糖和2×DMEM 培养基在无菌试管中相混以后，再向管中加入0.2mL 的细胞悬液，充分混匀，注入铺有1.2%琼脂糖底层平皿中，逐形成双琼脂层。待上层琼脂凝固后，置入37℃ 5%CO2温箱中培养10～14天。
(5)把平皿放置在倒置显微镜下，观察细胞克隆数。计算形成率。
软琼脂培养法常用检测肿瘤细胞和转化细胞系。试验中琼脂与细胞相混时，琼脂温度不宜超过40℃。接种细胞的密度每平方厘米不超过35个，一般6cm 的平皿接种1000个细胞。正常细胞在悬浮状态下不能增殖，不适用于软琼脂克隆形成试验。
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